細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1） 準備F-12K培養(yǎng)基；優(yōu)質胎牛血清，10%；雙抗，1%。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

二． 細胞處理：

1） 復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

中文名稱：IGF-IR/InsR和ALK抑制劑（GSK1838705A）

英文名稱：GSK1838705A

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg

產(chǎn)品貨號：BJ-01X8275

細胞培養(yǎng)方法：

1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2、細胞復蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。

3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；

③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

人 PROK1 / EG-VEGF 基因全長ORF克隆牛脂酰輔A合成免疫試劑盒進口、分裝

人 P53 轉錄變體1 基因全長ORF克隆牛脂聯(lián)素(ADP)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應

人 S100B 基因全長ORF克隆牛脂多糖結合蛋白(LBP)免疫試劑盒*直銷

人 S100A2 基因全長ORF克隆牛脂蛋白脂(LPL)免疫試劑盒進口、組裝

人 S100A1 基因全長ORF克隆牛載脂蛋白B100(Apo-B100)免疫試劑盒進口、分裝

人 CNTN4 轉錄變體1 基因全長ORF克隆牛孕激素/孕酮(PROG)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應

人 IL1R8 基因全長ORF克隆牛誘導型一氧化氮合成(iNOS)免疫試劑盒*直銷

人 IL18RAP / IL1R7 基因全長ORF克隆牛游離纖溶抑制因子/凝血激活的纖溶抑制物(TAFI)免疫試劑盒進口、組裝

人 DR6 / TNFRSF21 基因全長ORF克隆牛印度刺猬因子(IHH)免疫試劑盒進口、分裝

人 CNTN3 基因全長ORF克隆牛乙酰輔A羧化合成(ACC)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應

人 COMP / THBS5 基因全長ORF克隆牛乙酰輔A(acetyl-CoA)免疫試劑盒*直銷

IGF-IR/InsR和ALK抑制劑（GSK1838705A）過氧化氫酶測定試劑盒(紫外法)  100管/96樣  Catalase (CAT) assay kit (Ultraviolet)馬鈴薯葡萄糖瓊脂（USP）平板  9cm*10

細胞丙二醛測定試劑盒(微板法)  400T  Cell Malondialdehyde (MDA) assay kit (Colorimetric method)5g 乙酸－ 1 －萘脂 1-Naphthyl Acetate 室溫保存

總超氧化物歧化酶測定試劑盒(WST-1法)  48T|96T  Superoxide Dismutase (SOD) assay kit (WST-1 method)50T 破傷風芽孢梭菌PCR檢測試劑盒  低溫運輸，-20℃保存

植物丙二醛測定試劑盒(微板法)  48T  Plant Malondialdehyde (MDA) assay kit (Colorimetric method)100 mg DiOC6（3） 化物 Fluorescent Probe and Tracer -20℃保存

超氧化物歧化酶分型測試盒(羥胺法)[測Cu-Zn、Mn、總]  100管/48樣|50管/24樣  Superoxide Dismutase (SOD) typed assay kit (Hydroxylamine method)250mL Borate Buffer（硼酸鹽緩沖液），0.5M,pH9.5  Borate Buffer，0.5M,pH9.5  常溫保存

微量丙二醛測定試劑盒(TBA法)  100管/48樣|50管/24樣  Microscale Malondialdehyde (MDA) assay kit (TBA method)5次 97孔板PCR片段純化回收試劑盒（離心法） 96 Microwell Plate PCR Clean-Up Kit 常溫

丙二醛測定試劑盒(TBA法)  50管/48樣|100管/96樣  Malondialdehyde (MDA) assay kit (TBA method)2 ug pGL2 -basic pGL2 -basic 低溫運輸，-20℃保存

總超氧化物歧化酶測試盒(羥胺法)  100管/96樣|50管/48樣  Total Superoxide Dismutase (T-SOD) assay kit (Hydroxylamine method)沙氏葡萄糖肉湯（usp） Sabouraud-dextrose Broth 250g

肌酐測定試劑盒(肌氨酸氧化酶法)(微板法)  96T  Creatinine (Cr) Assay kit ( sarcosine oxidase )1瓶 Hela P10s-11F細胞株 Hela P10s-11F 低溫運輸和保存

甘油含量測試盒(組織)(微量酶標法)  100T  Glycerol Assay Kit李氏增菌肉湯LB2 Listeria Enrichment Broth 10ml*20支/包

類風濕因子測定試劑盒(膠乳增強免疫比濁法)  R1：40ml×1 R2：10ml×1  Rheumatoid factor Assay Kit1瓶 ZR75-1細胞株 ZR75-1 低溫運輸和保存