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Akt抑制劑(SC66)
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Akt抑制劑(SC66)公司正在出售的產品:Phospho-Estrogen Receptor alpha (Ser305) 磷酸化雌激素受體α抗體 規(guī)格: 0.1mlRobo 軸突導向受體抗體 規(guī)格: 0.1mlTM9SF4 跨膜蛋白9家族成員4抗體 規(guī)格: 0.2mlHPV16 L2 人瘤毒16型L2抗體 規(guī)格: 0.2mlC3c/Complement fragment 3c 補體片
  Akt抑制劑(SC66)的詳細資料:

培養(yǎng)操作步驟

1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;

2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);

3.在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時;

4.將經過計數的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;

5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。 

產品參數:

中文名稱

英文名稱

產品規(guī)格

產品貨號

Akt抑制劑(SC66)

SC66

1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg

BJ-01X8228

商品詳細介紹:

SC66是一種新型Akt抑制劑,降低細胞活力,這種作用存在劑量和時間依賴性,且抑制肝癌(HCC)細胞的集落形成和誘導凋亡。

注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途!

:871361-88-5

純度:99.96%

分子量:276.33

儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。

實驗報告:

一、分離與培養(yǎng):

1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??;

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;

3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);

5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);

二、免疫熒光鑒定:

1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;

2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;

5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;

6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

2.png 

實驗要點及說明:

1.本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細胞培養(yǎng),懸浮細胞可使用滴片法;

2.所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質玻璃,并經過鉻酸洗液處理;

3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕;

4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率;

5.如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

操作要點:

1)將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預熱;準備一個15mL無菌的離心管,加入8mL預熱培養(yǎng)基。

2)將凍存細胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復溫(可準備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內,再逐步轉移到水浴鍋中)。輕輕晃動凍存管,使細胞能在1~2min內*解凍,使細胞能盡快通過最易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。

3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內,將管內細胞轉移至準備好的離心管內,輕輕吹打液體,使細胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次,均轉移至離心管內。

4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養(yǎng)基,吹打制成細胞懸液。

5)將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內,補加適量的培養(yǎng)基,輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻,放入溫箱內培養(yǎng)。

6)第二天觀察細胞貼壁生長情況,換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng),待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代,細胞活力恢復后才能進行后續(xù)的實驗。

OMD 基因全長ORF克隆人Seryl- tRNA合成,細胞質(SARS/SERS)免疫試劑盒進口、組裝

CD66c / CEACAM6 基因全長ORF克隆人Salusin Beta(Salusin β)免疫試劑盒進口、分裝

CLEC10A 轉錄變體2 基因全長ORF克隆人Salusin Alpha(Salusin α)免疫試劑盒現貨供應

CER1 基因全長ORF克隆人SAA/LDL復合物 免疫試劑盒*直銷

CD38 基因全長ORF克隆人S100鈣結合蛋白P(S100P)免疫試劑盒進口、組裝

ApoE 基因全長ORF克隆人S100鈣結合蛋白A9/鈣粒蛋白B(S100A9)免疫試劑盒進口、分裝

PRSS1 基因全長ORF克隆人S100鈣結合蛋白A8/鈣粒蛋白A(S100A8)免疫試劑盒現貨供應

PLAU / UPA 基因全長ORF克隆人S100鈣結合蛋白A8/A9復合物(S100A8/A9)免疫試劑盒*直銷

INHBB 基因全長ORF克隆人S100鈣結合蛋白A6/鈣粒蛋白A(S100A6)免疫試劑盒進口、組裝

PRSS2 基因全長ORF克隆人S100鈣結合蛋白A12/鈣粒蛋白C(S100A12)免疫試劑盒進口、分裝

TGF-beta 1 基因全長ORF克隆人S100鈣結合蛋白A11(S100A11)免疫試劑盒現貨供應

Akt抑制劑(SC66)Hedgehog通道拮抗劑(Cyclopamine)  5mg|10mg|50mg|100mg  Cyclopamine2 ug pRL-SV40 pRL-SV40 低溫運輸,-20℃保存

p53-MDM2拮抗劑(RG7388)  1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg  RG7388250mL 非凍型細菌RNA保存液 Bacterial RNALOCKER 常溫

尼日利亞菌素鈉鹽(鉀離子載體)(鉛離子載體)  5mg|10mg|25mg|50mg|100mg  Nigericin sodium salt2 ug pcDNA3.1/V5-His B pcDNA3.1/V5-His B 低溫運輸,-20℃保存

轉錄拮抗劑(ICG-001)  1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg  ICG-001氯硝胺18%甘油(DG18)瓊脂 DG18 Agar 250g

DNA甲基化試劑(Streptozocin)  1mL(10mM)|100mg|500mg  Streptozocin25g 甲基纖維素 Methyl Cellulose 室溫干燥保存

抗有絲分裂制劑  1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg|500mg  Monomethyl auristatin E50T 牛傳染性鼻氣管炎病毒PCR檢測試劑盒  低溫運輸,-20℃保存

HT1080凋亡誘導劑  1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg  AP1903100mL Ficoll-Paque介質 Ficoll-Paque 常溫保存

烷化劑Temozolomide  1mL(10mM)|10mg|50mg|100mg|200mg|500mg|1g  Temozolomide2 ug pmCherry- C1 pmCherry- C1 低溫運輸,-20℃保存

PPAR拮抗劑(GW9662)  1mL(10mM)|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg  GW9662C.L.E.D培養(yǎng)基添加劑 C.L.E.D Medium Supplement 1ml*5支

微管穩(wěn)定劑Docetaxel  1mL(10mM)|25mg|50mg|100mg|200mg  Docetaxel1瓶 S-180細胞株 S-180 低溫運輸和保存

Calcitriol  2mg|5mg|10mg|50mg|100mg  Calcitriol金黃菌檢驗檢驗培養(yǎng)基  

 


產品相關關鍵字: Akt 抑制劑
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