細胞培養(yǎng)操作規(guī)程： 一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備： 1） 準備F-12K培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗，1%。 2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。 3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。 二． 細胞處理： 1） 復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。 2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。 中文名稱：細胞衰老β-半乳糖苷酶染色試劑盒 英文名稱：Senescence β-Galactosidase Staining Kit 產(chǎn)品規(guī)格：>100次 產(chǎn)品貨號：BJ-01X6569 本試劑盒是一種基于衰老時SA-β-Gal(senescence-associated β-galactosidase)活性水平上調(diào)而對衰老細胞或組織進行染色檢測的試劑盒。在普通的光學(xué)顯微鏡下就可以觀測到細胞或組織的衰老情況。本試劑盒可以用于培養(yǎng)細胞的衰老檢測，也可以用于組織切片的衰老檢測。 試劑盒組份： β-半乳糖苷酶染色固定液—————100ml X-Gal溶液————————————5ml β-半乳糖苷酶染色液A——————1ml β-半乳糖苷酶染色液B——————1ml β-半乳糖苷酶染色液C——————100ml 絕大多數(shù)正常細胞被認為僅有有限的分裂能力，在不能分裂后就進入衰老(senescence)狀態(tài)。此時細胞仍然是存活的，但細胞的基因和蛋白的表達譜發(fā)生了很大改變。衰老(senescence)的細胞不能在一些常規(guī)的刺激下再誘導(dǎo)細胞分裂，并且衰老細胞的細胞周期分布也比較特殊，不同于一些損傷誘導(dǎo)的細胞休眠，也不同于細胞生長接觸抑制的情況。衰老細胞細胞通常體積變大，表達pH 6.0時有高酶活性的β-半乳糖苷酶。細胞衰老也被認為是生物體抑制腫瘤的一種方式，同時也是生物體老化(aging)的一種潛在原因。 本細胞衰老β-半乳糖苷酶染色試劑盒，以X-Gal為底物，在衰老特異性的β-半乳糖苷酶催化下會生成深藍色產(chǎn)物。從而在光學(xué)顯微鏡下很容易觀察到變成藍色的表達β-半乳糖苷酶的細胞或組織。 |
細胞培養(yǎng)方法： 1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代 ①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次； ②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化； ③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止； ④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清； ⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基； ⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。 2、細胞復(fù)蘇： ①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。 ②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。 3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種 ①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶） ②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化； ③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞； ④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。 操作規(guī)程 1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時. 2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。 3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。 4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。 5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。 6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。 7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。 8、結(jié)果分析 a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100 b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90) Parechovirus(PeV) 雙?？虏《咎结樂晒舛縋CR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Hepatitis B Virus(HBV)乙型肝炎病毒C型LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Rhizoma paridis重樓染料法PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周 Porcine Kobuvirus(PKV)豬嵴病毒(庫布病毒)RT-LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 蛇源性成分染料法熒光定量PCR試劑盒 種源性檢測/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Actinomyces naeslundii內(nèi)氏放線探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Capillaria obsignata封閉毛細線蟲LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Avibacterium paragallinarum副雞禽桿探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Radix polygalae遠志PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周 Bacillus larvae幼蟲芽胞桿（美洲蜂幼蟲腐臭病）探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Rhizoma smilacis glabrae土茯苓LAMP鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周 Radix paeoniae rubra赤芍LAMP鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周 細胞衰老β-半乳糖苷酶染色試劑盒大鼠胱抑素SA(CST2)免疫試劑盒*直銷 人血小板膜糖蛋白Ⅳ(GP-Ⅳ)免疫試劑盒進口、組裝 大鼠Ⅰ型前膠原N端前肽(PⅠNP)免疫試劑盒進口、組裝 人溶血血小板活化因子(lyso-PAF)免疫試劑盒進口、分裝 LesEndo瓊脂 英文名稱：m-Endo Agar，LES 產(chǎn)品規(guī)格：250g 人抗生長激素(GH)抗體免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng) SSDC培養(yǎng)基（ISO） 英文名稱：SSDC Medium 產(chǎn)品規(guī)格：250g 人肝脂(HL)免疫試劑盒*直銷 肌醇測定培養(yǎng)基 英文名稱：Inositol Assay Broth 產(chǎn)品規(guī)格：250g 人κB抑制蛋白激(IKK)免疫試劑盒進口、組裝 豬氧化低密度脂蛋白(OxLDL)免疫試劑盒進口、組裝 |
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