中文名稱：JAK1和JAK2抑制劑(CYT387)

英文名稱：CYT387

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg

產(chǎn)品貨號：BJ-01X7301

細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1） 準(zhǔn)備F-12K培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗，1%。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

二． 細胞處理：

1） 復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

細胞培養(yǎng)方法：

1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2、細胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。

3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；

③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。

Sporothrix schenckii申克孢子細LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周HSP105  熱休克蛋白105抗體 規(guī)格: 0.1mlMouse Anti-Bov IgG/Cy5.5  Cy5.5標(biāo)記的小鼠抗牛IgG 規(guī)格: 0.1ml

Duck Enteritis Virus鴨腸炎病毒探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周Defensin β2/DEFB2/HBD-2  防御素β2抗體 規(guī)格: 0.1mlC1orf93  1號染色體開放閱讀框93抗體 規(guī)格: 0.2ml

Classical Swine Fever Virus-Vaccine(CSFV-Vaccine)豬瘟病毒疫苗株探針法熒光定量RT-PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周ARRDC3  抑制蛋白結(jié)構(gòu)域蛋白3抗體 規(guī)格: 0.2mlET-1  內(nèi)皮素-1抗體 規(guī)格: 0.2ml

Radix adenophorae南沙參LAMP鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周SNF5  轉(zhuǎn)錄調(diào)控激活蛋白SNF5抗體 規(guī)格: 0.2mlCCR-3  細胞表面趨化因子受體3抗體 規(guī)格: 0.1ml

Calymmatobacterium granulomatis肉芽腫鞘桿LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周phospho-CK18(Ser74)  磷酸化細胞角蛋白18抗體 規(guī)格: 0.1mlNOS-2/iNOS  氮合成-2抗體（誘導(dǎo)型） 規(guī)格: 0.1ml

Latino virus(LATV)拉蒂諾病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周MEGF5/Slit3  復(fù)合型表皮生因子樣結(jié)構(gòu)域蛋白5抗體 規(guī)格: 0.2mlHistone H3-like protein  組蛋白H3樣抗體 規(guī)格: 0.2ml

Cucumber Mosaic Virus(CMV)黃瓜花葉病毒RT-PCR試劑盒 植物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周phospho-ASK1(Ser967)  磷酸化細胞凋亡信號調(diào)節(jié)激1抗體 規(guī)格: 0.2mlKLK12  激肽釋放12抗體 規(guī)格: 0.1ml

溶血性鏈球熒光LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用） 50次PICK1  蛋白激Cα相互作用蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2mlphospho-Acinus(Ser1180)  磷酸化泡Acinus蛋白抗體 0.1ml

Rickettsia gravesii白堊立克次氏體LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周CD10/CALLA/Neprilysin  CD10抗體 規(guī)格: 0.1mlChloramphenicol  抗體 規(guī)格: 0.2ml

Bovine Papular Stomatitis Virus(BPSV)牛丘疹性口炎病毒探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周Goat Anti-Mouse IgM/Alexa Fluor 647  Alexa Fluor 647標(biāo)記的羊抗小鼠IgM 規(guī)格: 0.1mlArfaptin 1  ADP核糖基化因子結(jié)合蛋白1抗體 規(guī)格: 0.1ml

JAK1和JAK2抑制劑(CYT387)變構(gòu)Akt抑制劑

蛋白激酶抑制劑(Staurosporine)

MEK抑制劑(PD98059)

CDK4/6抑制劑(LY2835219)

表皮生長因子受體抑制劑(EGFR抑制劑)

含人PRC2的野生型EZH2抑制劑

Btk抑制劑(PCI-32765)

EZH2甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑(GSK126)

受體相互作用蛋白1激酶抑制劑

AMP活化蛋白激酶激活劑(AMPK激活劑)

Cdk4和Cdk6抑制劑(Palbociclib)

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)