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線粒體超氧化物染色試劑盒-M13
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線粒體超氧化物染色試劑盒-M13公司正在出售的產品:5g 二甲基鈉 Cacodylic Acid Sodium Salt 室溫干燥保存2 ug pACYC 184 pACYC 184 低溫運輸,-20℃保存抗生素檢定培養(yǎng)基6號(7.8-8.0) Antibiotic Agar 6 250g1瓶 Eca-109細胞株 Eca-109 低溫運輸和保存MUG快速鑒定大腸試劑 5ml*10支/盒
  線粒體超氧化物染色試劑盒-M13的詳細資料:

培養(yǎng)操作步驟

1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;

2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);

3.在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時;

4.將經過計數的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;

5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。 

產品參數:

中文名稱

英文名稱

產品規(guī)格

產品貨號

線粒體超氧化物染色試劑盒-M13


30T|50T

BJ-01X6658

商品詳細介紹:

M13線粒體超氧化物染色/檢測試劑盒是利用M系列探針進行線粒體超氧化物特異性染色的試劑盒。本試劑盒中的M13線粒體超氧化物染色探針為紅色熒光標記的線粒體探針,具有510/580nm 的大激發(fā)/發(fā)射波長。

M13線粒體超氧化物染色探針是一種細胞滲透型的對活細胞中的線粒體體進行選擇性染色的一類新型熒光染料,該探針可以選擇性標記線粒體,包含標記線粒體的弱巰基反應性的氯甲基官能團。只需簡單孵育細胞,即可穿過細胞膜并直接聚集在活性線粒體上。一旦進入線粒體后,快速被超氧化物氧化,并產生紅色熒光。M13線粒體超氧化物染色探針只可被超氧化物氧化,而不被其他活性氧類(ROS)和活性氮類(RNS)氧化。氧化產物結合核酸后,可產生大量紅色熒光。

儲存條件:染料-20℃避光保存;避免反復凍融;稀釋液2-8℃保存。

按每個樣用200μl染料計,試劑盒可以做30-150個樣或60-300個樣;

按每個樣用100μl染料計,試劑盒可以做60-300個樣或120-600個樣。

有效期:六個月。

實驗報告:

一、分離與培養(yǎng):

1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??;

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;

3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);

5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);

二、免疫熒光鑒定:

1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;

2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;

5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;

6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

2.png 

實驗要點及說明:

1.本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細胞培養(yǎng),懸浮細胞可使用滴片法;

2.所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質玻璃,并經過鉻酸洗液處理;

3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕;

4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率;

5.如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

操作要點:

1)將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預熱;準備一個15mL無菌的離心管,加入8mL預熱培養(yǎng)基。

2)將凍存細胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復溫(可準備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內,再逐步轉移到水浴鍋中)。輕輕晃動凍存管,使細胞能在1~2min內*解凍,使細胞能盡快通過最易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。

3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內,將管內細胞轉移至準備好的離心管內,輕輕吹打液體,使細胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次,均轉移至離心管內。

4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養(yǎng)基,吹打制成細胞懸液。

5)將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內,補加適量的培養(yǎng)基,輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻,放入溫箱內培養(yǎng)。

6)第二天觀察細胞貼壁生長情況,換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng),待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代,細胞活力恢復后才能進行后續(xù)的實驗。

100mL MOPS Buffer,0.5M,pH9.0   MOPS Buffer,0.5M,pH9.0   常溫保存標準II號營養(yǎng)瓊脂進口、國產Standard II Nutrient Agar細菌計數、不含糖,可作血瓊脂基礎和傳代用(MERCK方法)250

阪崎腸桿菌顯色培養(yǎng)基(DFI瓊脂)  200g 78-5000 pg/mL 人肝生長因子受體(HGF receptor)ELISA試劑盒

胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基(TSB)  250ml*20瓶

1 管 ER2738大腸桿菌 ER2738 E.coli Strain -80℃保存 15.6-1000 umol/L (SPA)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)

125mL Saponine Permeating Solution in PBS(皂素PBS滲透液),5X  Saponine Permeating Solution in PBS,5X  常溫保存 31.2-2000 pg/mL ELISA Kit for Human Stanniocalcin-2

2mg L- 氨基酸氧化 L-Amino Acid Oxidase  4℃保存 0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human Axin-1

2 ug pAvu6-27 pAvu6-27 低溫運輸,-20℃保存 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human E-selectin

10g 脫氧膽酸鈉 Deoxycholic Acid,Sodium Salt                室溫干燥保存 0.78-50 ng/mL 人乳糖凝集素1(LGALS1)ELISA試劑盒

50T 水稻內源基因PCR檢測試劑盒  低溫運輸,-20℃保存 78-5000 pg/mL ELISA Kit for Human Midkine

麥康凱液體培養(yǎng)基(顆粒)  250g

新生 Novobiocin 4.5mg/支*5 0.78-50 mIU/mL ELISA Kit for Human A disintegrin and metalloproteinase with thrombospondin motifs 20

線粒體超氧化物染色試劑盒-M13大鼠酸性成纖維細胞生長因子(aFGF/FGF-1)免疫試劑盒現貨供應

ADAM金屬肽含血小板反應蛋白1型13(ADAMTS13)免疫試劑盒進口、分裝

大鼠鈣衛(wèi)蛋白(CALP)免疫試劑盒*直銷

(TP-5)免疫試劑盒進口、組裝

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人前列腺素D2(PGD2)免疫試劑盒進口、分裝

阪崎桿菌分離瓊脂(ESIATM) 英文名稱:Enterobacter Sakazakii Isolation Agar 產品規(guī)格:250g

人抗巨細胞病毒(CMV)抗體(IgG)免疫試劑盒現貨供應

LPM瓊脂添加劑 英文名稱:LPM Agar Additive 產品規(guī)格:1ml*5

人分泌成分(SC)免疫試劑盒*直銷

肝浸粉 英文名稱:Liver Infusion 產品規(guī)格:100g

產品相關關鍵字: 線粒體超氧化物染色 試劑盒
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