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內(nèi)質(zhì)網(wǎng)紅色熒光探針
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內(nèi)質(zhì)網(wǎng)紅色熒光探針公司正在出售的產(chǎn)品:0.156-10 ng/mL 人含桿狀病毒IAP重復蛋白6(BIRC6)ELISA試劑盒 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Zinc transporter 3 1.56-100 ng/mL 人RBL1ELISA試劑盒 0.156-10 ng/mL 人β葡萄糖苷(β-glucosidase)ELISA試劑盒 0.312-20
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中文名稱:內(nèi)質(zhì)網(wǎng)紅色熒光探針

英文名稱:Endoplasmic Reticulum Tracker Red

產(chǎn)品規(guī)格:20μl

產(chǎn)品貨號:BJ-01X6573

本探針是一種內(nèi)質(zhì)網(wǎng)紅色熒光探針,可以用于活細胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)特異性熒光染色。本探針為采用Molecular Probes公司的BODIPY TR進行了熒光標記的glibenclamide,分子量為915.23。

Glibenclamide即glyburide,中文名為格列苯脲,是一種2型糖尿病治療藥物,可以結(jié)合主要定位在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上的sulphonylurea受體。因此熒光標記的glibenclamide就可以用作內(nèi)質(zhì)網(wǎng)特異性的熒光探針。

本探針對于細胞的毒性極低。而傳統(tǒng)的DiOC6(3)對ER染色的同時也對細胞有一定的毒性。本探針呈紅色熒光,檢測時的大激發(fā)波長為587nm,大發(fā)射波長為615nm。

本探針按照后附的使用說明染色后,用等固定后染色效果可以被部分保留。本品提供了探針稀釋液,使本探針的使用更加便捷。按照1:1000的比例稀釋,可以配制20ml探針工作液;按照1:3000的比例稀釋,可以配制60ml探針工作液。

儲存條件:-20℃避光,有效期6個月。

細胞培養(yǎng)操作規(guī)程:

一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:

1) 準備F-12K培養(yǎng)基;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%;雙抗,1%。

2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3) 凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。

二. 細胞處理:

1) 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。


QQ截圖20220509112004.png

細胞培養(yǎng)方法:

1、細胞傳代:細胞密度達到80-90%時即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次;

②加入2ml0.25%(T25瓶),使覆蓋整個瓶或皿,蓋好放入培養(yǎng)箱消化;

③1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化;若細胞還是貼壁,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止;

④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清;

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基;

⑥懸浮細胞直接離心收集,細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2、細胞復蘇:

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,時間1min左右,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,補加適量培養(yǎng)基。

3、細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,加入1mL 0.25%(T25瓶)

②1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化;

③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1ml凍存液重懸細胞;

④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。

Fructus citri sarcodactylis佛手探針法PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 20度 一年 2-4周

Salmonella meleagridis火雞沙門氏LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 20度 一年 2-3周

HIV-2 Provirus HIV-2前病毒探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 20度 一年 2-3周

Amapari virus(AMAV)阿馬帕里病毒RT-LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 20度 一年 2-3周

Zaire Ebola Virus(ZEBO)扎伊爾埃博拉病毒RT-LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 20度 一年 2-3周

Medulla junci燈心草LAMP鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 20度 一年 2-4周

Bulbus fritillariae cirrhosae川貝母染料法PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 20度 一年 2-4周

Simian Virus 40(SV40)猴病毒40 探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 20度 一年 2-3周

Pelargonium Flower Break Virus(PFBMV)天竺葵花破裂病毒RT-PCR試劑盒 植物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 20度 一年 2-3周

Mycoplasma canis犬支原體PCR試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用) 50次 低溫 20度 一年 2-3周

Group A β-hemolytic Streptococcus A組β溶血性鏈球(A組乙型溶血性鏈球)探針法熒光定量PCR試劑盒 定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 20度 一年 2-3周

Buffalo Pox Virus(BPXV)水牛正痘病毒LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 20度 一年 2-3周

內(nèi)質(zhì)網(wǎng)紅色熒光探針吡哆醇Y培養(yǎng)基 英文名稱:Pyridoxine Y medium 產(chǎn)品規(guī)格:250g

β乳糖蛋白抗體IgG 免疫試劑盒*直銷

豬血管活性腸肽(VIP)免疫試劑盒*直銷

E(VE)免疫試劑盒進口、分裝

小鼠胃泌酸調(diào)節(jié)素免疫試劑盒進口、分裝

綿羊白介素13(IL-13)免疫試劑盒進口、組裝

小鼠肥大細胞類胰蛋白(MCT)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應

大鼠整合素αM型((ITG αM/CD11b)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應

兔子腎上腺髓質(zhì)素(ADM)免疫試劑盒進口、分裝

大鼠激活谷(PAG)免疫試劑盒*直銷

人脂聯(lián)素受體1(ADIPOR1)免疫試劑盒進口、組裝

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數(shù)目,需根據(jù)細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。

8、結(jié)果分析

a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

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