国产69精品久久久久久久久久久久_国产精品99精品久久免费_亚洲制服丝袜一区二区三区_亚洲制服丝袜有码中文欧美_国产精品亚洲产品一区二区三区_亚洲日韩国产二区无码_国产尺码和欧洲尺码表对照_日韩一卡2卡3卡4卡乱码免费网站_真实双人插画的视频

公司公告

更多公告>>
公司動(dòng)態(tài)
當(dāng)前位置:首頁 > 公司動(dòng)態(tài) > 博湖試劑-提取總蛋白簡(jiǎn)易法
博湖試劑-提取總蛋白簡(jiǎn)易法
點(diǎn)擊次數(shù):731 更新時(shí)間:2014-06-24

提取總蛋白簡(jiǎn)易法

1、自配裂解液(pH 8.5-9.0):50 mM Tris-HCl,2 mM EDTA, 100 mM NaCl,0.5% Triton X-100,調(diào)pH值至8.5-9.0備用;用前加入100 μg/ml 溶菌酶,1μl/ml 的蛋白酶抑制劑PMSF。該裂解液用量為10-50ml 裂解液/1g濕菌體。

2、將40ml 菌液在12000g,4℃下離心15分鐘收集菌體,沉淀用PBS懸浮洗滌2遍,沉淀加入1ml裂解液懸浮菌體。

3、超聲粉碎,采用300w,10s超聲/10s間隔,超聲20min,反復(fù)凍融超聲3次至菌液變清或者變色。

4、1000g離心去掉大碎片,上清可直接變性后PAGE電泳檢測(cè),或者用1% SDS溶液透析后凍存。

缺點(diǎn):Western blotting結(jié)果表明,疏水性跨膜蛋白提取效率有限。

二、從Trizol裂解液中分離總蛋白

1、Trizol溶解的樣品研磨破碎后,加分層,2-8℃下10000g離心15min,上層水相用于RNA提取,體積約為總體積的60%。

2、用乙醇沉淀中間層和有機(jī)相中的DNA。每使用1ml Trizol加入0.3ml無水乙醇混勻,室溫放置3min,2-8℃不超過2000g離心5min。

3、將上清移至新的EP管中,用異丙醇沉淀蛋白質(zhì)。每使用1ml Trizol加入1.5ml異丙醇,室溫放置10min,2-8℃下12000g離心10min,棄上清。

4、用含有0.3M 鹽酸胍的95%乙醇洗滌。每1ml Trizol加入2ml洗液,室溫放置20min, 2-8℃下7500g離心5min,棄上清,重復(fù)洗滌2次。zui后加入2ml無水乙醇,渦旋后室溫放置20min,2-8℃下7500g離心5min,棄上清。

5、冷凍干燥5-10min,1%SDS溶液溶解,反復(fù)吹打,50℃溫浴使其*溶解,2-8℃下10000g離心10min去除不溶物。

6、替代方案:將3中的酚醇上清液移至小分子量透析袋中,在2-8℃的1% SDS溶液中透析3次,1000g離心10min去除沉淀,上清可直接用于蛋白實(shí)驗(yàn)。

三、從新鮮樣品中提取疏水性膜蛋白(Triton X-114去污劑法)

1、配制疏水性蛋白提取液(非裂解液):1% Triton X-114,150mM NaCl, 10mM Tris-HCl,1mM EDTA,調(diào)pH值至8.0備用。

2、菌液于4℃條件下15000g離心15min收集菌體;用1ml 含有5mM MgCl2 的PBS洗滌3次,zui后于4℃條件下15000g離心15min收集菌體。

3、菌體沉淀加入1ml冷提取液,于4℃條件下放置2h,17000g離心10min,去除沉淀取上清。

4、將上述上清中的Triton X-114含量增加到2%,再加入20mM的CaCl2抑制部分蛋白酶活性,37℃條件下放置10min使其分層。室溫下1000g離心10min使液相和去污相充分分層。

5、將液相和去污相分開,分別用10倍體積的冷丙酮在冰上沉淀45min。

6、于4℃條件下17000g離心30min,用去離子水洗滌沉淀3次。

7、將沉淀溶解在1% SDS溶液中,測(cè)定蛋白濃度,比較液相和去污相中蛋白提取效率,一般是去污相中疏水性膜蛋白較多,適于進(jìn)一步蛋白實(shí)驗(yàn)。

8、SDS-PAGE進(jìn)一步分析液相和去污相的蛋白圖譜。

聯(lián)系人:王經(jīng)理
點(diǎn)擊這里給我發(fā)消息
電話:
86-021-57763112
手機(jī):
18917018169

智慧城市網(wǎng)

推薦收藏該企業(yè)網(wǎng)站
亚洲男男gay做受ⅹxx男国| 性猛交富婆xxxⅹ乱大交| 国外岁拗女稀缺资源| 韩国r级合集3小14分| 欧美xxx黑人xyx性爽| 羞羞漫画~汗汗漫画入口| 芭乐视频污app| 牲高潮99爽久久久久777| 被男狂揉吃奶胸高潮视频| 日本激情视频| av免费观看一区| 亚洲人成网站在线| 黄色裸体视频| 91黄免费| 久久露脸国语精品国产91| 强壮公次次弄得我高潮不断网站| 黄色大片久久久| 国产极品紧身牛仔裤av片| 日本边添边摸边做边爱的剧情介绍| 150篇欲乱刺激小说合集| 《色戒》未删减在线电影| 日韩二区三区四区| 日韩国产欧美中文字幕| 成人午夜精品一区二区三区| 91成品人电影| a人片中文字幕一区二区| 天狼一二三切换路线转| 黄色打扑克| 羞羞视频免费观| 亚洲无吗视频在线| 一级在线电影| 一级黄色aaaa| 茄子视频毛片| 日韩精品一区二区在线观看| 日本草草视频| 名器高h| 国产又爽又黄的视频| 三级特黄60分钟在线播放视频| jizz国产zzz老师水多视频| free小树林性少妇pics| 色婷婷综合久久久|