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ELISA實驗結(jié)合物的定量測定
點擊次數(shù):180 更新時間:2024-11-13

一般是對結(jié)合物中的酶和IgG進行定量測定。常用紫外分光光度計于403nm和280nm進行測定,然后按下列公式計算:

酶量(mg/ml)=OD403×0.42

IgG量(mg/ml)=(OD280-OD403×0.4)×0.94×0.62

對于過碘酸鈉氧化法制備的標記抗體量,按下列公式計算:

IgG量(mg/ml)=(OD280-OD403×0.34)×0.62

已知酶量和IgG量后,即可計算出標記抗體的摩爾(mol)比值。

HRP/IgG摩爾比值=HRP(mg/ml)/IgG(mg/ml)×4

結(jié)合物中酶總量=HRP(mg/ml)×結(jié)合物溶液量

結(jié)合物產(chǎn)率=結(jié)合物中酶總量/標記時加入的酶量×100%

用于ELISA的結(jié)合物的酶量為400(g/ml時效果一般,為500(g/ml時效果較好,達 1000(g/ml時效果好。mol.比值由于結(jié)合物中含的IgG并不wan全可靠,所以不能作為主要參數(shù)。一般認為mol.比值為0.7時效果一般,1.0時效果較好,1.5-2.0時最好。酶結(jié)合率為 7%時效果一般,為9%-10%較好,達30%以上時最好。


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